幾種葉綠素含量測定方法比較

葉綠素含量是植物生長過程中一個重要的生理指標,由於其對周圍環境很敏感,並與植物的光合作用、營養吸收等密切相關,被廣泛作為植物生長的常規測定指標項目。葉綠素含量的測定方法有多種,在國際上以傳統的Arnon法(也稱研磨法)應用最為廣泛。但該法需要把植物材料研磨並經轉移、過濾或離心處理,不僅工作量大,而且不可避免地使試驗人員較長時間與揮發於空氣中的試劑相接觸,對人體損害較大。近年來,直接浸取法受到重視,張憲政等用不同配比的混合液對葉綠素進行提取,證明了用混合液提取的可行性。李得孝,吳誌旭等對傳統的Arnon法進行了改進,將樣品冷凍處理後,用50℃丙酮靜置提取並進行測定,極大提高了工作效率。

(1)研磨法。稱取0. 5 g樣品於研缽內,加入少量CaCO3和5 mL 80%的丙酮,將材料充分研磨細碎直至變白(約5 min),轉移至10 mL具塞離心管中,定容至刻度,搖勻後置於4℃冰箱中靜置12 h,離心10 min (2000 r/min),取上清液測定。(2)直接浸取法。稱取0. 5 g樣品放入10 mL具塞離心管中,用80%丙酮定容至刻度,於暗櫃中靜置72 h浸取,取上清液測定。(3)樣品冷凍後用50℃提取液提取法。稱取0. 5 g樣品於10 mL具塞離心管中,置冰箱中冷凍2h,取出後加入10mL在水浴鍋中加熱至50℃的80%丙酮,充分振搖後於暗櫃中靜置4h,取上清液測定。（4）葉綠素計法：葉綠素計是所有方法中最快捷的，你隻需手持葉綠素計，將葉片插入儀器的感應部位，然後合上測量探頭即可。應用於這種測定的儀器又被叫做便攜式葉綠素儀

，因為該葉綠素計擁有小巧的機身
，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋並帶到現場進行測量。

在以上幾種測定方法中

，直接浸取法提取效果最好,但耗時長,傳統研磨法葉綠素的損失較大,冷凍後用50℃提取液提取法操作簡便且提取速度較快,在提取率和穩定性方麵均顯示良好的優越性。冷凍後用50℃提取液提取法的最優試驗條件為將試驗材料冷凍1 h後,靜置提取3 h。而葉綠素儀法
，則相較於其他三種化學方法

，更加快速方便。而且用SPAD-502測(ce)定(ding)葉(ye)綠(lv)素(su)含(han)量(liang)時(shi)
，不(bu)會(hui)對(dui)葉(ye)片(pian)造(zao)成(cheng)損(sun)傷(shang)，這(zhe)也(ye)是(shi)使(shi)用(yong)葉(ye)綠(lv)素(su)計(ji)的(de)另(ling)一(yi)大(da)好(hao)處(chu)。因(yin)為(wei)你(ni)不(bu)需(xu)要(yao)摘(zhai)下(xia)葉(ye)片(pian)，直(zhi)接(jie)用(yong)儀(yi)器(qi)夾(jia)住(zhu)葉(ye)片(pian)測(ce)定(ding)即(ji)可(ke)，這(zhe)樣(yang)就(jiu)可(ke)以(yi)在(zai)作(zuo)物(wu)的(de)生(sheng)長(chang)過(guo)程(cheng)中(zhong)全(quan)程(cheng)對(dui)特(te)定(ding)的(de)葉(ye)片(pian)進(jin)行(xing)監(jian)測(ce)，從(cong)而(er)得(de)到(dao)更(geng)科(ke)學(xue)的(de)分(fen)析(xi)結(jie)果(guo)。