一、原理

根gen據ju葉ye綠lv體ti色se素su提ti取qu液ye對dui可ke見jian光guang譜pu的de吸xi收shou
，利li用yong分fen光guang光guang度du計ji在zai某mou一yi特te定ding波bo長chang測ce定ding其qi吸xi光guang度du，即ji可ke用yong公gong式shi計ji算suan出chu提ti取qu液ye中zhong各ge色se素su的de含han量liang。根gen據ju朗lang伯bo―比爾定律

，某有色溶液的吸光度A與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比
，即A＝αCL式中：α比例常數。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時
，αweigaiwuzhidexiguangxishu。gezhongyousewuzhirongyezaibutongbochangxiadexiguangxishuketongguocedingyizhinongdudechunwuzhizaibutongbochangxiadexiguangduerqiude。ruguorongyezhongyoushuzhongxiguangwuzhi，zecihunheyezaimouyibochangxiadezongxiguangdudengyugezufenzaixiangyingbochangxiaxiguangdudezonghe。zhejiushixiguangdudejiahexing。jinyucedingyelvtisesuhunhetiquyezhongyelvsua
、b和類胡蘿卜素的含量

，隻需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A
，並根據葉綠素a

、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a
、b時為了排除類胡蘿卜素的幹擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰。

二、材料、儀器設備及試劑

（一）材料：新鮮（或烘幹）的植物葉片。

（二）儀器設備：1）分光光度計；2）電子頂載天平（感量0.01g）；3）研缽；4）棕色容量瓶； 5）小漏鬥；6）定量濾紙；7）吸水紙； 8）擦境紙；9）滴管。10）葉綠素測定儀（SPAD502葉綠素儀也可）

（三）試劑：1）95%乙醇（或80%丙酮）；2）石英砂；3）碳酸鈣粉。

三
、實驗步驟

1）取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或幹材料
，擦淨組織表麵汙物，剪碎（去掉中脈）
，混勻。

2）稱取剪碎的新鮮樣品 0.2g ，共3份

，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml 95%乙醇
，研成均漿，再加乙醇10ml，    繼續研磨至組織變白。靜置3～5min。

3）取濾紙1張
，置漏鬥中
，用乙醇濕潤
，沿玻棒把提取液倒入漏鬥中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇衝洗研缽、研棒及 殘渣    數次
，最後連同殘渣一起倒入漏鬥中。

4）用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用乙醇定容至25ml
，搖勻。

5）把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內，以95%乙醇為空白，在波長663nm和645nm下測定吸光度。      

四

、實驗結果計算

葉綠素a的含量 = 12.7*OD663 - 2.69*OD645

葉綠素b的含量 = 22.9*OD645 - 4.86*OD663

葉綠素a
、b的總含量 = 8.02*OD663 + 20.20*OD645