小麥澱粉酶活性與其萌發關係的探討
來源： http://98fo.cn/ 類別：實用技術 更新時間：2013-04-23 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網提供】 新xin陳chen代dai謝xie是shi生sheng命ming的de基ji本ben特te征zheng之zhi一yi，一yi切qie生sheng物wu的de生sheng命ming都dou靠kao新xin陳chen代dai謝xie的de正zheng常chang運yun轉zhuan來lai維wei持chi。酶mei是shi維wei持chi生sheng物wu新xin陳chen代dai謝xie的de物wu質zhi基ji礎chu，是shi生sheng物wu化hua學xue反fan應ying的de催cui化hua劑ji，在zai生sheng物wu體ti內nei起qi重zhong要yao作zuo用yong。新xin陳chen代dai謝xie是shi生sheng物wu化hua學xue課ke程cheng的de重zhong點dian和he難nan點dian內nei容rong，“小麥萌發前後澱粉酶活力的比較”shiyanshiputonggaoxiaoshengwuxuejixiangguanzhuanyeshengwuhuaxuekechengxinchendaixiebufendeshiyan。gaishiyanduimengfaqianhouxiaomaidianfenmeijinxingtiqu，bingqieliyongjiangluoshuzhiyiceliangqihanliang，ranhouyongfenguangguangdufacedingtiquyedianfenmeidehuoli，bingduimengfaqianhouxiaomaidianfenmeidehuolijinxingbijiao，yilejieshengwuzaixinchendaixieguochengzhongmeihuolidebianhua。gaishiyanjiyoudingxingtiquyouyoudinglianghuoliceding，erqieshiyancailiaoheshiyanxianxiangyurenmenshenghuomiqiexiangguan，nengyinqixueshengdexingqu。
雖sui然ran實shi驗yan操cao作zuo不bu難nan，但dan實shi驗yan材cai料liao有you萌meng發fa前qian後hou兩liang種zhong小xiao麥mai種zhong子zi，實shi驗yan操cao作zuo既ji有you酶mei的de提ti取qu，又you有you酶mei活huo力li的de測ce定ding，活huo力li測ce定ding時shi除chu了le實shi驗yan材cai料liao管guan外wai，還hai有you標biao準zhun管guan和he空kong白bai管guan，很hen多duo學xue生sheng不bu能neng在zai規gui定ding的de時shi間jian內nei完wan成cheng實shi驗yan，影ying響xiang學xue生sheng的de積ji極ji性xing和he實shi驗yan教jiao學xue效xiao果guo。為wei此ci，筆bi者zhe對dui實shi驗yan操cao作zuo做zuo了le一yi些xie合he適shi、必bi要yao的de改gai進jin，簡jian化hua了le實shi驗yan操cao作zuo和he實shi驗yan結jie果guo計ji算suan，減jian少shao實shi驗yan誤wu差cha，提ti高gao實shi驗yan準zhun確que性xing，並bing總zong結jie出chu實shi驗yan操cao作zuo中zhong應ying該gai注zhu意yi的de問wen題ti，提ti高gao了le實shi驗yan教jiao學xue效xiao果guo。
1實驗原理
小麥種子中貯藏的糖類主要以澱粉的形式存在，小麥種子萌發過程中產生的澱粉酶能使澱粉分解為麥芽糖。麥芽糖具有還原性，能與3，5一二硝基水楊酸進行氧化還原反應，生成棕色的3一氨基一5yixiaojishuiyangsuan，yongfenguangguangdujiceliangxiguangdu，xiguangdudeshuzhiyumaiyatangdenongduchengzhengbi，yongxiguangduhebiaozhunmaiyatangnongdujisuanchutiquyedemaiyatangnongdu，zuizhongjisuanchuyangpindedianfenmeihuoli。
2實驗材料與儀器
小麥種子購於安徽省黃山市種子站。麥芽糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、可溶性澱粉、氯化鈉、3，5一二硝基水楊酸等均為國產分析純，實驗室用水為蒸餾水。紫外可見分光光度計，降落數值儀（浙江托普製造），數顯水浴鍋（上海製造）。
3原實驗操作和酶活力計算
3．1原實驗操作
小麥種子浸泡2．5h後，放人25恒溫培養箱內發芽。分別取15顆幹燥和發芽第4天的小麥種子，加200mg海砂和10mL1％氯化鈉溶液，在乳缽內用力磨碎。室溫靜置提取20rain，中間攪拌幾次。將提取液離心(1500r/min)6～7min，將上清液倒入量筒，測定酶提取液的總體積。進行酶活力測定時，用磷酸緩衝液將酶提取液稀釋10倍。然後按照實驗教材用分光光度法測定麥芽糖濃度，並計算出酶的活力。
3．2原酶活力計算原酶活力計算公式為：總活力單位=xn酶×V酶，其中酶為酶液中麥芽糖的濃度，13酶為酶液稀釋倍數，V酶為提取酶液的體積。
4改進後的實驗操作和酶活力計算
4．1改進後的實驗操作
小麥種子浸泡2．5h後，放入25~C恒溫培養箱內發芽。分別取15顆幹燥和發芽第4天的小麥種子，加200mg海砂和15mL1％氯化鈉溶液，在乳缽內用力磨碎。室溫靜置提取20min，中間攪拌幾次。將提取液離心(1500r/min)6～7rain，將上清液倒入100mI容量瓶，用磷酸緩衝液稀釋和定容。進行酶活力測定時，直接取一定體積的定容液用分光光度法測定麥芽糖濃度，並計算出酶的活力。
4．2改進的酶活力計算
實驗操作修改後酶活力計算公式也要進行相應的修改，這樣才能保證實驗數據的準確。實驗改進後的酶活力計算公式簡化為：總活力單位=0酶x100，其中C為提取液中麥芽糖的濃度，100為酶提取液的總體積。
5效果評價
小麥種子粉碎及酶提取液轉移、離心等實驗操作均會造成提取液損失，帶來一定的實驗誤差。將1％氯化鈉的體積由10mL增加到15mL，可以減少實驗誤差、增強提取效果。實驗改進前，提取液最終總體積的確定經過了量筒測量和稀釋兩步驟；該操作中用量筒測量提取液體積誤差較大，而且將提取液稀釋10倍bei又you進jin一yi步bu將jiang誤wu差cha放fang大da，這zhe些xie都dou會hui影ying響xiang到dao最zui後hou實shi驗yan數shu據ju和he實shi驗yan結jie果guo。改gai進jin後hou的de實shi驗yan操cao作zuo，將jiang量liang筒tong測ce量liang體ti積ji和he稀xi釋shi兩liang步bu驟zhou簡jian化hua為wei用yong容rong量liang瓶ping定ding容rong一yi個ge步bu驟zhou，簡jian化hua了le實shi驗yan步bu驟zhou。而er且qie用yong容rong量liang瓶ping定ding容rong體ti積ji比bi用yong量liang筒tong測ce量liang體ti積ji精jing確que，最zui後hou測ce得de的de酶mei活huo力li實shi驗yan數shu據ju必bi然ran更geng準zhun確que。因yin此ci，改gai進jin後hou的de實shi驗yan既ji簡jian化hua實shi驗yan操cao作zuo、縮短實驗時間又減少實驗誤差、提高實驗準確性。與原酶活力計算公式相比，改進後的酶活力計算公式更簡捷，計算更方便，更易於被學生理解和接受。
6實驗中應注意的問題
(1)萌發小麥種子隻需要種子部位，要棄去萌發的小葉子和嫩莖。否則將葉綠素帶人提取液，會影響後麵吸光度的測量。(2)將乳缽內的提取液轉入離心管後，要用少量1％氯化鈉溶液潤洗乳缽2次，並將潤洗液一起並入離心管。(3)為了防止酶活性降低或失活，如果室溫較高，提取時最好將乳缽放在冰水中降溫；酶提取液離心後應立即用磷酸緩衝液稀釋定容和進行酶活力測定。(4)教材規定的酶活力單位反應溫度為25℃，酶活力測定時所加的各種試劑均要在25℃預熱l0min。(5)將酶提取液與1％澱粉反應3min後立即將試管放入沸水浴中使酶失活。因此，實驗時應將水浴鍋提前加熱到10WE。
雖sui然ran實shi驗yan操cao作zuo不bu難nan，但dan實shi驗yan材cai料liao有you萌meng發fa前qian後hou兩liang種zhong小xiao麥mai種zhong子zi，實shi驗yan操cao作zuo既ji有you酶mei的de提ti取qu，又you有you酶mei活huo力li的de測ce定ding，活huo力li測ce定ding時shi除chu了le實shi驗yan材cai料liao管guan外wai，還hai有you標biao準zhun管guan和he空kong白bai管guan，很hen多duo學xue生sheng不bu能neng在zai規gui定ding的de時shi間jian內nei完wan成cheng實shi驗yan，影ying響xiang學xue生sheng的de積ji極ji性xing和he實shi驗yan教jiao學xue效xiao果guo。為wei此ci，筆bi者zhe對dui實shi驗yan操cao作zuo做zuo了le一yi些xie合he適shi、必bi要yao的de改gai進jin，簡jian化hua了le實shi驗yan操cao作zuo和he實shi驗yan結jie果guo計ji算suan，減jian少shao實shi驗yan誤wu差cha，提ti高gao實shi驗yan準zhun確que性xing，並bing總zong結jie出chu實shi驗yan操cao作zuo中zhong應ying該gai注zhu意yi的de問wen題ti，提ti高gao了le實shi驗yan教jiao學xue效xiao果guo。
1實驗原理
小麥種子中貯藏的糖類主要以澱粉的形式存在，小麥種子萌發過程中產生的澱粉酶能使澱粉分解為麥芽糖。麥芽糖具有還原性，能與3，5一二硝基水楊酸進行氧化還原反應，生成棕色的3一氨基一5yixiaojishuiyangsuan，yongfenguangguangdujiceliangxiguangdu，xiguangdudeshuzhiyumaiyatangdenongduchengzhengbi，yongxiguangduhebiaozhunmaiyatangnongdujisuanchutiquyedemaiyatangnongdu，zuizhongjisuanchuyangpindedianfenmeihuoli。
2實驗材料與儀器
小麥種子購於安徽省黃山市種子站。麥芽糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、可溶性澱粉、氯化鈉、3，5一二硝基水楊酸等均為國產分析純，實驗室用水為蒸餾水。紫外可見分光光度計，降落數值儀（浙江托普製造），數顯水浴鍋（上海製造）。
3原實驗操作和酶活力計算
3．1原實驗操作
小麥種子浸泡2．5h後，放人25恒溫培養箱內發芽。分別取15顆幹燥和發芽第4天的小麥種子，加200mg海砂和10mL1％氯化鈉溶液，在乳缽內用力磨碎。室溫靜置提取20rain，中間攪拌幾次。將提取液離心(1500r/min)6～7min，將上清液倒入量筒，測定酶提取液的總體積。進行酶活力測定時，用磷酸緩衝液將酶提取液稀釋10倍。然後按照實驗教材用分光光度法測定麥芽糖濃度，並計算出酶的活力。
3．2原酶活力計算原酶活力計算公式為：總活力單位=xn酶×V酶，其中酶為酶液中麥芽糖的濃度，13酶為酶液稀釋倍數，V酶為提取酶液的體積。
4改進後的實驗操作和酶活力計算
4．1改進後的實驗操作
小麥種子浸泡2．5h後，放入25~C恒溫培養箱內發芽。分別取15顆幹燥和發芽第4天的小麥種子，加200mg海砂和15mL1％氯化鈉溶液，在乳缽內用力磨碎。室溫靜置提取20min，中間攪拌幾次。將提取液離心(1500r/min)6～7rain，將上清液倒入100mI容量瓶，用磷酸緩衝液稀釋和定容。進行酶活力測定時，直接取一定體積的定容液用分光光度法測定麥芽糖濃度，並計算出酶的活力。
4．2改進的酶活力計算
實驗操作修改後酶活力計算公式也要進行相應的修改，這樣才能保證實驗數據的準確。實驗改進後的酶活力計算公式簡化為：總活力單位=0酶x100，其中C為提取液中麥芽糖的濃度，100為酶提取液的總體積。
5效果評價
小麥種子粉碎及酶提取液轉移、離心等實驗操作均會造成提取液損失，帶來一定的實驗誤差。將1％氯化鈉的體積由10mL增加到15mL，可以減少實驗誤差、增強提取效果。實驗改進前，提取液最終總體積的確定經過了量筒測量和稀釋兩步驟；該操作中用量筒測量提取液體積誤差較大，而且將提取液稀釋10倍bei又you進jin一yi步bu將jiang誤wu差cha放fang大da，這zhe些xie都dou會hui影ying響xiang到dao最zui後hou實shi驗yan數shu據ju和he實shi驗yan結jie果guo。改gai進jin後hou的de實shi驗yan操cao作zuo，將jiang量liang筒tong測ce量liang體ti積ji和he稀xi釋shi兩liang步bu驟zhou簡jian化hua為wei用yong容rong量liang瓶ping定ding容rong一yi個ge步bu驟zhou，簡jian化hua了le實shi驗yan步bu驟zhou。而er且qie用yong容rong量liang瓶ping定ding容rong體ti積ji比bi用yong量liang筒tong測ce量liang體ti積ji精jing確que，最zui後hou測ce得de的de酶mei活huo力li實shi驗yan數shu據ju必bi然ran更geng準zhun確que。因yin此ci，改gai進jin後hou的de實shi驗yan既ji簡jian化hua實shi驗yan操cao作zuo、縮短實驗時間又減少實驗誤差、提高實驗準確性。與原酶活力計算公式相比，改進後的酶活力計算公式更簡捷，計算更方便，更易於被學生理解和接受。
6實驗中應注意的問題
(1)萌發小麥種子隻需要種子部位，要棄去萌發的小葉子和嫩莖。否則將葉綠素帶人提取液，會影響後麵吸光度的測量。(2)將乳缽內的提取液轉入離心管後，要用少量1％氯化鈉溶液潤洗乳缽2次，並將潤洗液一起並入離心管。(3)為了防止酶活性降低或失活，如果室溫較高，提取時最好將乳缽放在冰水中降溫；酶提取液離心後應立即用磷酸緩衝液稀釋定容和進行酶活力測定。(4)教材規定的酶活力單位反應溫度為25℃，酶活力測定時所加的各種試劑均要在25℃預熱l0min。(5)將酶提取液與1％澱粉反應3min後立即將試管放入沸水浴中使酶失活。因此，實驗時應將水浴鍋提前加熱到10WE。
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