大豆蛋白的提取與含量測定
大豆蛋白的提取與含量測定
大豆（學名：Glycine max），中國古稱菽，是一種其種子含有豐富的蛋白質的豆科植物。大豆呈橢圓形、球形，顏色有黃色、淡綠色、黑色等，故又有黃豆、青豆、heidouzhicheng。danbaizhifenzishihanyousuanxingjituanhejianxingjituandeliangxingdianjiezhi，zaidengdiandianshi，danbaizhifenzidesuanxingjituanhejianxingjituandejieliduxiangdeng，chengweidaiyouzhengfudianhexiangdengdeliangxinglizi，zaidianchangzhongbuxiangliangjiyidong，bingqiejiyichendian。anjisuanzuchengbutongdedanbaizhi，juyoubutongdedengdiandian。genjuzaiyidingtiaojianxia（如PH，離子強度等）它們所帶電荷的數量和種類，分子的大小及形狀等方麵的差異，可以采用電泳，離子交換柱層析等方法對它們進行分離分析。
試劑和器材
1、試劑
（1）10%Nacl （2）0.2%NaoH
（3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL
（5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH
2、器材
（1）離心機 （2）燒杯 （3）滴管
（4）PH試紙（5）自動型凱氏定氮儀等
操作方法
1、水抽提
將豆粉5g用約40毫升左右的蒸餾水少量多次的添加攪拌，常溫下攪拌抽提15min， 3800r/min離心15min，取上清液，如上清液不清澈再經過濾。
取上清液1毫升稀釋50倍留做蛋白測定。
其餘清液加入等體積在冰箱中預冷的丙酮，用滴管少量多次慢慢滴加（攪拌）6mol/L和1 mol/L HCL，調PH4.5~5.0，3800r/min，離心15min，收集沉澱物，反複用丙酮攪拌洗滌離心2次，得到粉末狀蛋白質幹粉，稱重，計算粗產率。
Folin酚法測定蛋白質含量
目的要求
掌握Folin酚法測定蛋白濃度的原理和方法
蛋白質濃度可以從它們的物理化學性質，如比重、紫外吸收，折射率等測定而得知；或用化學方法，如定氮、雙縮脲反應，Folin酚試劑反應等方法來計算。也可以用染色法，如氨基黑，考馬斯亮藍法測定。還可以用熒光激發法，氰胺 ，放射性同位素計數等靈敏度較高的方法。在這些方法中，其中雙縮脲法和Folin酚法是一般實驗室中常用的方法，它們操作簡便，迅速，不需要複雜而昂貴的儀器。Folin酚法靈敏度高，比雙縮脲法靈敏100倍。
原理
Folin酚(fen)法(fa)是(shi)所(suo)用(yong)試(shi)劑(ji)是(shi)由(you)兩(liang)部(bu)分(fen)組(zu)成(cheng)，試(shi)劑(ji)甲(jia)相(xiang)當(dang)於(yu)雙(shuang)縮(suo)脲(niao)試(shi)劑(ji)，蛋(dan)白(bai)質(zhi)中(zhong)的(de)肽(tai)鍵(jian)在(zai)堿(jian)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)與(yu)銅(tong)離(li)子(zi)起(qi)顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)。試(shi)劑(ji)乙(yi)中(zhong)的(de)磷(lin)鉬(mu)酸(suan)和(he)磷(lin)鎢(wu)酸(suan)在(zai)堿(jian)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)不(bu)穩(wen)定(ding)，易(yi)被(bei)酚(fen)類(lei)還(hai)原(yuan)而(er)呈(cheng)蘭(lan)色(se)（鉬蘭和鎢蘭混合物）。
由於蛋白質中含有帶酚基的酪氨酸還原呈蘭色，溶液蘭色的深淺與蛋白濃度有較好的線性關係。因此用Folin酚法測定蛋白質含量，靈敏度較高。
yangpinzhonghanfenleihuahewujiningmengsuanjunyouganraozuoyong，ruguoyangpinsuandujiaogaozexiansejiaoqian，yaotigaotansuannayiqingyanghuanadenongdu。cifayekecedingrongyezhonglaoansuanheseansuandenongdu。
Folinfenfayoubushaojuyoucaozuofangfa，danjibenyuanlidoushiyige，zhishizaigerongyedenongdujitianjialiangshang，baowendewendujibaowenshijianshangyousuobutongeryi，benshiyansuojieshaodeshibenshichangyongde，lingmindujiaogaodecaozuofangfa。
試劑和器材
1、材料：
本實驗所提取大豆蛋白水提取液，經合適稀釋至可測定範圍。
2、試劑：
（1）0.03mol/L PH7.8的磷酸緩衝液。
（2）200μg/ml的標準酪（牛血清）蛋白溶液。
（3）Folin試劑甲：（俗稱堿性銅試劑）：10g
NaoH溶於400ml水中，再加50gNa2CO3；
稱取0.5g酒石酸鉀鈉溶於80mlH2O中，再加0.25gCuSO4；以上兩溶液混合定容到500ml，冰箱保存可用一個月。
4、Folin試劑乙：在2升磨口回流裝置的燒瓶內，加鎢酸鈉（NaWO4•2H2O）100g，鉬酸鈉（NaMoO•2M2O）25g，蒸餾水700ml，85%的磷酸50ml，濃鹽酸100ml，充分混合後，小火回流10小時，再加硫酸鋰（Li2SO4）150g，蒸餾水50ml及數滴溴。然後開口沸騰15min，以驅除過量的溴，冷卻後定容到1000ml，過濾後呈金黃色，於棕色並中保存，可使用多年。
蛋白質的測量可以使用儀器直接來進行測量，可以使用全自動定氮儀，它主要用來檢測糧食、食品、乳製品、飲料、飼料、土壤、水、藥物、沉澱物和化學品等中的氨氮、蛋白質氮等含量。檢測方法符合國標、 AOAC、ISO等。
