分光光度法測定葉綠素含量
來源: 本站 類別:實用技術 更新時間:2010-06-08 閱讀次
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實驗目的:1.了解植物組織中葉綠素的分布及性質;2.掌握測定葉綠素含量的原理和方法。
實驗原理:yelvsuguangfancunzaiyuguoshudenglvsezhiwuzuzhizhong,bingzaizhiwuxibaozhongyudanbaizhijiehechengyelvti。dangzhiwuxibaosiwanghou,yelvsujiyoulichulai,youliyelvsuhenbuwending,duiguang、熱較敏感;在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素,在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種:葉綠素a 和b,兩者均易溶於乙醇、乙醚、bingtonghelvfang。guanghezuoyongmozhongdelvsesesu,tashiguanghezuoyongzhongbuhuoguangdezhuyaochengfen。yelvsushijishangjianyusuoyounengyingguanghezuoyongdeshengwuti,baokuolvsezhiwu、原核的藍綠藻(藍菌)和真核的藻類。葉綠素從光中吸收能量,然後能量被用來將二氧化碳轉變為碳水化合物。
葉綠素的含量測定方法:1.原子吸收光譜法:通過測定鎂元素的含量,進而間接計算葉綠素的含量;2.分光光度法:利用分光光度計測定葉綠素提取液在最大吸收波長下的吸光值,即可用朗伯―比爾定律計算出提取液中各色素的含量。3.葉綠素儀法:用葉綠素計或者便攜式葉綠素測定儀測定植物的葉綠素含量,省時方便,浙江托普儀器有限公司生產不同型號的葉綠素儀,如果有需要,可致電24小時服務熱線:。
葉綠素含量測定:分光光度計
1.葉綠素a 和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有最大吸收,且兩吸收曲線相交於652nm 處。因此測定提取液在645nm、663nm、652nm 波長下的吸光值,並根據經驗公式可分別計算出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的含量。
2.分光光度計儀器、原料和試劑:分光光度計、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏鬥、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管。
3.分光光度計原料:新鮮(或烘幹)的植物葉片
4.分光光度計試劑:1. 96%乙醇(或80%丙酮);2. 石英砂;3. 碳酸鈣粉;
5.操作步驟:取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或幹材料,擦淨組織表麵汙物,去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g,放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10mL,繼續研磨至組織變白。靜置3~5min。取濾紙1張置於漏鬥中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏鬥,濾液流至100mL 棕色容量瓶中;用少量乙醇衝洗研缽、yanbangjicanzhashuci,zuihouliantongcanzhayiqidaoruloudouzhong。yongdiguanxiquyichun,jianglvzhishangdeyelvtisesuquanbuxirurongliangpingzhong。zhizhilvzhihecanzhazhongwulvseweizhi。zuihouyongyichundingrongzhi100mL,搖勻。取葉綠體色素提取液在波長665nm、645nm 和652nm 下測定吸光度,以95%乙醇為空白對照。
6.計算:按照實驗原理中提供的經驗公式,分別計算植物材料中葉綠素a、b 和總葉綠素的含量。

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