利用凱氏定氮儀測量牛乳中蛋白質的含量
在用國標法測定牛乳中的蛋白質時,采用多孔井式電加熱爐對牛乳樣品進行消化,在加入適量廉價的催化劑後,將消化爐的電壓調至220v 時,消化一份牛乳樣品僅需 100~105min。試驗結果表明,本方法具有精密(變異係數=0.62%)、準確、穩定、簡單、快速、安全等優點,可以滿足批量樣品的檢測需要,下麵一起學習一下利用凱氏定氮儀測量牛乳中蛋白質的含量。
danbaizhishifuzadehandanyoujihuahewu,zhuyaoshiyougezhonganjisuangoucheng。tashiniurudezhongyaozuchengchengfen,yishizhongyaodeyingyangwuzhi。danbaizhidefadingcedingfangfa,yikaidaershifamingdedingdanfaweijichu,genjugezhongdanbaizhijiegeyougudingbishudedanzheyishishi,tongguoduiandecedingertuisuanchudanbaizhihanliang,cifasuodedehandanliangchulequeshishuyudanbaizhizuchengchengfendedanyiwai,haibaokuofeidanbaizhizuchengdeqitayoujijiwujitaidan,suoyihuansuansuodededanbaizhihanliangchengzuoweicudanbaihanliang。蛋白質測定儀就是利用這一經典的測定蛋白質含量的方法研發製成,所得結果準確、穩定,但測定時間較長,一般一份樣品至少需要6~8h 始得結果。本文采用井式電加熱爐,增大消化管的受熱麵積,使消化管內的試樣及濃H2SO4在井式電加熱爐內取得最大的熱效應,同時在消化前置入適宜的廉價催化劑,從而大大縮短了消化時間。
本文采用的方法能對牛乳中的蛋白質進行快速測定。牛niu乳ru中zhong的de蛋dan白bai質zhi是shi含han氮dan的de有you機ji化hua合he物wu,樣yang品pin與yu硫liu酸suan和he催cui化hua劑ji一yi同tong加jia熱re消xiao化hua,使shi蛋dan白bai質zhi分fen解jie,分fen解jie的de氨an與yu硫liu酸suan結jie合he生sheng成cheng硫liu酸suan銨an,然ran後hou堿jian化hua蒸zheng餾liu使shi氨an遊you離li,用yong硼peng酸suan吸xi收shou後hou再zai用yong鹽yan酸suan標biao準zhun溶rong液ye滴di定ding,根gen據ju酸suan的de消xiao耗hao量liang計算出氮的含量,再乘以換算係數即得蛋白質含量。
儀器設備與試劑:KDN―08A定氮儀(浙江托普儀器有限公司);電子分析天平;硫酸(H2SO4,分析純,比重1.84);硫酸銅(CuSO45H2O,分析純);硫酸鉀(K2SO4,分析純);40%氫氧化鈉(NaOH);2%硼酸(H3BO3);1mol/L 鹽酸(HCl);混合指示劑:0.1%甲基紅乙醇溶液+0.5%溴甲酚綠乙醇溶液(1∶ 1 )。
樣品處理:精確稱取樣品5.0g於消化管中,加入0.5gCuSO45H2O、5.0gK2SO4,再沿消化管壁徐徐加入10mlH2SO4(比重1.84),並輕輕搖蕩,使樣品全部被脫水炭化。
消化:將消化管分別放入消化架各個孔內,然後置於消化爐上,並立即開啟抽吸泵水閥,使抽吸泵處於吸氣狀態。接通電源,在加熱初始階段,須注意觀測,防止試樣因急沸而飛濺(初化時,電壓調至180~190v)。待泡沫停止後,將電壓調至220v,消化100~105min後冷卻。
蒸餾:
①在250ml 三角接受瓶中加入2%H3BO3 50ml 和2~3滴混合指示劑,將此瓶套在蒸餾器的接收管上,並且讓管口浸沒在H3BO3溶液中。
②在冷卻後的消化管中加入 50~80ml 蒸餾水,40~50ml 40%NaOH 溶液。
③扳動蒸餾托盤架把需要蒸餾的消化管固定在托盤架上,然後開啟蒸汽開關,向消化管內注入蒸汽,進行蒸餾。待接受瓶液麵高於 150ml 刻度時,將接受瓶下移,使接受瓶離開液麵。繼續蒸餾半分鍾,用蒸餾水洗瓶衝洗出氣口,然後取下接受瓶,待滴定之用。滴定用 0.1mol/LHCl 標準溶液滴定接受瓶內的溶液,滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止。記下消耗 HCl 的毫升數。
結果計算:

測定結果:
在消化管中加入供試樣品 5.0g,然後按照上述分析步驟進行測定(一次可以消化 8 個樣品),結果如表所示:

結論:
在(zai)用(yong)半(ban)微(wei)量(liang)凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)測(ce)定(ding)牛(niu)乳(ru)中(zhong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)含(han)量(liang)時(shi),采(cai)用(yong)多(duo)孔(kong)井(jing)式(shi)電(dian)加(jia)熱(re)爐(lu),並(bing)在(zai)消(xiao)化(hua)前(qian)置(zhi)入(ru)適(shi)宜(yi)的(de)廉(lian)價(jia)催(cui)化(hua)劑(ji),對(dui)牛(niu)乳(ru)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua),極(ji)大(da)地(di)提(ti)高(gao)了(le)消(xiao)化(hua)樣(yang)品(pin)的(de)熱(re)效(xiao)應(ying),同(tong)時(shi)將(jiang)消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)亦(yi)縮(suo)短(duan)了(le)很(hen)多(duo)。牛(niu)乳(ru)蛋(dan)白(bai)質(zhi)中(zhong)含(han)有(you)7.1%(質量分數)的賴氨酸和2.6%(質量分數)的de組zu氨an酸suan,這zhe兩liang種zhong氨an基ji酸suan中zhong的de氮dan在zai短duan時shi間jian內nei不bu易yi消xiao化hua完wan全quan,往wang往wang導dao致zhi總zong氮dan量liang偏pian低di。消xiao化hua時shi間jian過guo長chang會hui引yin起qi氨an的de損sun失shi。用yong本ben法fa測ce定ding牛niu乳ru中zhong的de蛋dan白bai質zhi,消xiao化hua一yi個ge樣yang品pin的de時shi間jian為wei100~105min,變異係數為0.62%。本方法所得結果精密、準確、穩定、簡單、快速、安全,可以滿足批量樣品的檢測需要。



