幾種蛋白質測定方法的比較
來源: http://www.98fo.cn 類別:實用技術 更新時間:2009-03-12 閱讀次
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蛋白質的定量,是生物化學中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有以下幾種方法:定氮法、紫外吸收法、Lowry法(Folin-酚試劑法)、Bradford法(考馬斯亮藍法)、BCA法等:
定氮法比較繁複,但較準確,往往以定氮法測定的蛋白質作為其他方法的標準蛋白。
紫外吸收法簡便、靈敏、快kuai速su,不bu消xiao耗hao樣yang品pin,測ce定ding後hou樣yang品pin仍reng能neng回hui收shou利li用yong。缺que點dian是shi準zhun確que度du較jiao差cha,幹gan擾rao物wu質zhi多duo,用yong標biao準zhun曲qu線xian法fa測ce定ding蛋dan白bai質zhi含han量liang時shi,對dui於yu那na些xie與yu標biao準zhun蛋dan白bai中zhong酪lao氨an酸suan和he色se氨an酸suan含han量liang差cha異yi大da的de蛋dan白bai質zhi,有you一yi定ding的de誤wu差cha。
Lowry法是較早發展的一種靈敏的檢測方法,最低靈敏度為5微克,通常測定範圍20-250微克。優點是靈敏度高,缺點是費時較長,要精確控製操作時間,標準曲線不是嚴格的直線形式,且專一性差,幹擾物質較多。
Bradford法是靈敏度更高的一種方法,優點有:靈敏度高,比lowry法高4倍左右,最低檢測達1-5微克;測定快速、簡便,染色穩定;幹擾物質少。確點是用於不同蛋白質測定時有較大的偏差;仍有幹擾,如SDS、去汙劑、Triton x100等;標準曲線有輕微的非線性。http://www.98fo.cn
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