葉綠素是植物吸收光能進行光合作用的重要物質基礎，它直接參與光能的吸收

、傳遞
、分配和轉化等過程，其含量的大小以及a/b的相對比值不僅可以反映植物的生長發育狀況、生理代謝水平及營養條件
，還可作為環境生理研究的重要參考指標[1]。因此
，對其含量及a/b比值進行測定與分析一直是植物生理學研究的重點內容。

葉綠素是脂溶性卟啉類化合物
，在分子結構上，葉綠素由脫鎂卟啉環、葉綠酸、葉綠醇、甲醇和二價鎂離子等部分構成，各葉綠素結構之間的差別很小，葉綠素a和b僅在吡咯環Ⅱ上的附加基團不同：前者是甲基，後者是甲醛基；在光學特性上，葉綠素a和b及其衍生物對紅光區(620~700 nm)和藍紫光區(400~500 nm)的光吸收特別強烈；而對綠光區(520~580 nm)的光則吸收較弱
，因而葉綠素呈現綠色。

目前，葉綠素的提取方法主要有有機溶劑萃取法、超臨界CO2萃取法、吸附樹脂萃取法、超聲波萃取法和微波萃取法等。其中微波輔助萃取法和超臨界CO2萃取法由於能夠大大降低提取時間
，並減少萃取溶劑的使用量
，逐漸受到人們的關注
，但超臨界CO2萃取法受操作複雜、設備昂貴、成cheng本ben較jiao高gao等deng因yin素su的de困kun擾rao，其qi應ying用yong領ling域yu也ye受shou到dao限xian製zhi。有you機ji溶rong劑ji萃cui取qu法fa有you直zhi接jie利li用yong葉ye綠lv素su易yi溶rong於yu有you機ji溶rong劑ji的de特te點dian
，選xuan用yong合he適shi的de有you機ji溶rong劑ji進jin行xing萃cui取qu

，並bing輔fu助zhu了le微wei波bo、超(chao)聲(sheng)波(bo)或(huo)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)分(fen)離(li)等(deng)手(shou)段(duan)來(lai)提(ti)高(gao)效(xiao)率(lv)和(he)純(chun)度(du)。因(yin)此(ci)，有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)萃(cui)取(qu)法(fa)是(shi)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)葉(ye)綠(lv)素(su)提(ti)取(qu)的(de)常(chang)規(gui)方(fang)法(fa)。葉(ye)綠(lv)素(su)含(han)量(liang)的(de)測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)主(zhu)要(yao)有(you)紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)、熒光分析法

、葉綠素測量儀法、光聲光譜法和高效液相色譜法等，其中分光光度法具有準確度高的特點，是葉綠素含量測定過程中應用最為廣泛的方法。

bizhenicaiyongyoujirongjicuiqufacongsangyezhongtiquyelvsu，bingliyongfenguangguangdufaduiyelvsuhanliangjinxingceding
，tongguofenxibutongjieweisangyejisangyebutongbuweideyelvsuhanliang，tantaosangyeyelvsudeguangputezhengjiqihanliangdebianhuaguilv

，yiqiweisangyeyelvsudetiqujihanliangcedingtigongfangfaxingcankao，bingweisangyeyelvsudejinyibuyanjiutigongcankaoshuju。

1材料與方法：

1.1材料

1.1.1試驗材料：桑葉，采自中國農業科學院蠶業研究所國家種質鎮江桑樹圃。

1.1.2主要試劑：試驗所用試劑均為分析純。

1.1.3主要儀器：UV-9100型紫外-可見分光光度計
，由浙江托普分析儀器有限公司生產；電熱恒溫水浴鍋，由杭州麥哲儀器設備廠生產；YP5001型電子天平，由浙江托普儀器廠生產；打孔器(d=0. 6 cm)。

1.2方法：

1.2.1葉綠素的提取含量測定方法。將采集到的新鮮桑葉帶回實驗室洗淨、擦幹後，用直徑為0.6 cm的打孔器打成小圓片

；選取5片稱重，然後用6ml有機溶劑在暗室浸提24 h；於5 000 r/min離心機中離心5min，取上清液置於光徑為1.0 cm的比色皿中，用紫外-可見分光光度計測定其吸光值，並利用Arnon法fa的de修xiu正zheng公gong式shi對dui其qi葉ye綠lv素su含han量liang進jin行xing計ji算suan
，分fen析xi桑sang葉ye葉ye綠lv素su的de光guang譜pu特te征zheng，進jin而er比bi較jiao研yan究jiu不bu同tong節jie位wei桑sang葉ye和he桑sang葉ye不bu同tong部bu位wei葉ye綠lv素su含han量liang的de變bian化hua規gui律lv，綠lv素su含han量liang用yongArnon法的修正公式進行計算：

其中
，V為萃取溶劑體積(ml)
；S為表麵積(cm2)，通過樣品個數(5片)與打孔器麵積(d=0.6 cm)之積進行計算；Ca為葉綠素a含量，Cb為葉綠素b含量，Ca+b為葉綠素a和b的含量之和；A645、A663分別代表在波長為645 nm和663 nm下的吸光度值
，所有試驗均重複3次。

1.2.2　桑葉葉綠素光譜特征分析。用紫外-可見分光光度計在360~700 nm的波長範圍內，測定不同波長條件下，桑葉葉綠素的吸光度值，繪製桑葉葉綠素的光譜圖。

2結果與分析：

2.1桑葉葉綠素的光譜特征：

通過測定不同波長條件下桑葉葉綠素的含量，繪製出其光譜圖(圖1)，由圖1可知：在試驗範圍內，桑葉葉綠素有2個強吸收帶
，分別為400~460 nm和640~680 nm
，其中400~460 nm為藍紫光區，吸收最高峰出現在432 nm處，而640~680 nm是紅光區，且在662 nm處出現最高吸收峰，這是由於葉綠素中的葉綠素a和葉綠素b分別在這2個波長處吸收最強，所得結果與其他高等植物葉片中葉綠素的吸收光譜圖基本一致。

2.3 桑葉不同部位的葉綠素含量測定結果：

一片桑葉因不同的光照強度、營養狀況及生理條件間的細微差別，會導致桑葉不同部位中葉綠素含量也有差異。該研究將桑葉分為3部分，即葉尖、葉中和葉柄，分別測定不同部位的葉綠素含量，結果如圖3所示。

由圖3可知，靠近葉柄處葉綠素含量明顯高於其他部位，葉綠素含量高低順序為葉柄處(葉中部(葉ye尖jian部bu
，呈cheng現xian出chu下xia部bu葉ye位wei大da於yu上shang部bu葉ye位wei的de規gui律lv。這zhe可ke能neng是shi因yin為wei植zhi物wu的de氮dan素su營ying養yang是shi從cong成cheng熟shu葉ye片pian向xiang幼you嫩nen葉ye片pian轉zhuan運yun
，葉ye綠lv素su含han量liang成cheng熟shu葉ye多duo於yu幼you嫩nen葉ye，使shi桑sang樹shu葉ye片pian葉ye色se隨sui之zhi發fa生sheng相xiang應ying變bian化hua而er導dao致zhi吸xi光guang值zhi的de不bu同tong。此ci外wai，葉ye尖jian部bu的de葉ye綠lv素sua/b比值最低，葉柄處的最高，葉中部其次，說明桑葉葉尖部最耐陰，葉綠素b含量較高，可適應陰生生境，而葉柄部相對最不耐陰。

3結論與討論：

對葉綠素進行準確測定是植物生理學的重點研究內容，葉綠素a和b含量的多少直接影響光合速率的大小

，葉綠素a/b值也能反映一定的光合速率
， a/b值高，光合活性也高

，光合活性高，植物就具有較高的光合速率。試驗結果表明：

①桑葉葉綠素光譜特征與其他高等植物葉綠素的光譜特征類似，可采用Arnon法的修正公式對葉綠素含量進行計算。

②中間節位的桑葉中葉綠素含量最高



，但其葉綠素a/b的比值卻最小
，雖然該結果存在一定爭議，但從葉綠素含量來看，桑樹光合作用的葉綠素主要來源是中部節位的葉片。

③對同一片葉子而言，因光照強度、yingyangzhuangkuangheshenglitiaojiandebutong，butongbuweiyepiandeyelvsuhanlianghuiyousuobutong，gaiyanjiujieguozhengshilezheyidian。yanjiufaxian，yebingchudeyelvsuhanliangzuigao， a/b值也最高，說明在葉柄處的光合速率最高

，且由於葉綠素b的含量較低，說明葉柄處較適應陽性生境，而葉尖處與其正好相反。

shiyanjinduisangyezhongyelvsudeguangputezhengjiqihanliangdebianhuaguilvjinxinglechubutantao
，gaijieguoweiyelvsudejinyibuyanjiutigonglebiyaodecankaoyijuheshujuzhichi。