如何提高丹參種子的淨度及進行種子質量評定
丹參為唇形科鼠尾草屬植物。又名紫丹參、紅根、血參、大(da)紅(hong)袍(pao)等(deng),藥(yao)用(yong)部(bu)分(fen)為(wei)幹(gan)燥(zao)根(gen)和(he)根(gen)莖(jing)。隨(sui)著(zhe)丹(dan)參(can)藥(yao)材(cai)需(xu)求(qiu)量(liang)的(de)增(zeng)加(jia),栽(zai)培(pei)麵(mian)積(ji)也(ye)隨(sui)之(zhi)增(zeng)大(da)。種(zhong)子(zi)育(yu)苗(miao)移(yi)栽(zai)是(shi)丹(dan)參(can)生(sheng)產(chan)上(shang)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)方(fang)法(fa),少(shao)數(shu)地(di)區(qu)也(ye)用(yong)分(fen)根(gen)繁(fan)殖(zhi)。丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)繁(fan)殖(zhi)比(bi)分(fen)根(gen)繁(fan)殖(zhi)簡(jian)便(bian)快(kuai),而(er)且(qie)移(yi)栽(zai)苗(miao)成(cheng)活(huo)率(lv)高(gao)、長勢整齊。但是,由於丹參花期長,受自然條件的影響大,造成種子成熟度不一致,出苗率低,在自然條件下丹參種子的萌發一般隻有30% ~40%,且出苗不齊。丹參種子易黴爛、不耐貯藏,陰濕、gaowendoushizhongzixunsuliebian。muqianzhongyaocaizhongzishengchanhaiduoweiyijiayihuxiaoguimojingying,youyugediqihouchayihezhongzichuzangdetiaojianhexiguanbuyizhi,shidezhongzizhiliangnanyikongzhi。benyanjiuduidancanzhongzidejingdufenxi、質量測定、真實性鑒定、水分測定方法,生活力的檢測方法進行了研究,為丹參種子質量檢驗提供依據。
1 材料
於2004年6月間在丹參主產區收集人工栽培的丹參當年產種子。編號分別為山東萊蕪(BB,BW,BL,ML)、平邑(LⅠ, LⅡ, SⅠ)、臨朐(SFⅡ,LQ)、曲阜(Q)。
2 方法
2.1 淨度分析
2.1.1 一份全試樣法
取LQ,Q, BL,ML, BB, BW6份丹參種子。采用“徒手減半法”從每份樣本中分取試驗樣本80 g左右。將試樣分離成幹淨種子、其他植物種子和一般雜質3種成分後分別稱重,以g表示,計算淨種子質量百分率、其他種子質量百分率、雜質質量百分率,在種子淨度檢驗台上進行淨度分析。
2.1.2 丹參實粒種子的清選
丹參種子空殼和癟粒情況嚴重,而且從外觀不易區分,尋找一種分離出丹參空殼與實粒種子的簡便方法。選取BW,BB,LQ,LⅡ,SⅠ,SFⅡ6份種子,分別用以下方法進行處理:
水分離法:常溫下,將種子浸泡於水中24 h,取上層的種子,用解剖刀逐粒剖開,將空殼和實粒的種子分別計數。再取下層的種子,與上層種子同樣操作。每處理2次重複,重複100粒。
風選法:取種子30~50 g,用種子吹風儀,風力由45逐漸上升到54,風選3 min後,將種子分成實粒和空殼兩部分,取其中一部分,隨機選取2個重複,每重複100粒,用解剖刀逐粒剖開,將空殼和實粒種子分別計數,再用同樣方法測定另一部分種子。
離心法:將種子放入10mL離心管中,蒸餾水為介質,平衡後,以2 400 r?mim-1離心10 min。取出上層和下層的種子,用解剖刀逐粒剖開,利用種子數粒儀將空殼和實粒的種子分別計數,每處理4次重複,重複100粒。 經過各種方法篩選後的實粒種子,置於雙層濾紙培養內,每皿50粒, 4次重複, 25℃, 12 h光照發芽,並觀察其發芽情況,選出最適方法。
2.2 質量測定
本試驗中,采取了百粒測定法、千粒測定法來測定丹參種子質量。百粒測定法選用的材料為“LQ”,“Q”,“BL”,“ML”,“BB”,“BW”6份丹參淨種子。千粒測定法選用的材料為“SⅠ”,“SFⅡ”,“BB”3份淨種子。
2.3 真實性鑒定
采用種子外觀形態法,隨機數取100粒淨種子,4次重複,逐粒觀察丹參種子形態特征並記錄。
2.4 水分測定
高恒溫烘幹法:取“LⅠ”,“LQ”2份丹參淨種子。烘幹4 h,最初2 h內,每隔15 min取出鋁盒稱重,而後每隔30 min取出稱重,至恒重,取出迅速放入幹燥器中冷卻至室溫,約30~40 min後稱重。
2.5 生活力測定
用丹參種子“LⅡ”,“Q”。采用溴麝香草酚蘭法(BTB法)、紅墨水染色法、四唑法以及紙上熒光法分別測定丹參種子的生活力,探討最佳方法。
3 結果與分析
3.1 淨度分析
3.1.1 不同方法清選丹參實粒種子
dancanzhongziyouyuchengshuqichang,caishouhousuiranwaiguanwanzheng,danzhongzipeidefayubuyizhi,xuduoweikongli,ruguobazhebufenzhongzidangzuowanzhengzhongzi,jiangyingxiangzhongzizhiliangjianyanfangfadejinyibufenxi,guxujinxingshilizhongzidefenli。yongshuifenlifa、風選法和離心法清選丹參種子後實粒種子占的比例分別為86.4%,98.9%,95.8%。以風選法效果最佳。
將經過3種方法分離出來的實粒種子進行發芽試驗,風選後的種子發芽率最高可達76%,而離心法後種子的發芽率隻有33%,雖然風選法和離心法篩選實粒種子的效率均較高,但離心法篩出的種子發芽率明顯低於其他2種方法低,說明種子經過離心後,種子受到傷害,發芽率顯著下降(表1)。故采用風力篩選法來去除丹參空殼。

表1 不同方法篩取丹參實粒種子後的發芽率%
3.1.2 淨度分析
種子的增失差都<5%,檢驗結果有效(表2)。

表2 丹參種子淨度分析結果%
丹參種子的淨度較低,種子淨度都低於70%,空殼在雜質中占有較大比例。由於丹參花期長,種子成熟度很不一致;開kai花hua時shi容rong易yi遇yu上shang雨yu期qi,引yin起qi種zhong子zi受shou粉fen不bu良liang,種zhong子zi發fa育yu不bu完wan全quan,空kong殼ke較jiao多duo。在zai種zhong子zi流liu入ru市shi場chang前qian沒mei有you經jing過guo初chu步bu的de清qing潔jie處chu理li,從cong而er淨jing度du較jiao低di,影ying響xiang種zhong子zi的de整zheng體ti質zhi量liang。
3.2 質量測定
丹參種子千粒重較穩定。“ML”千粒重最大,為1.99 g,“BB”千粒值最小,為1.81 g,各樣品各測定值之間變異係數均小於4.0,結果有效(表3)。

表3 百粒法丹參種子千粒重
用千粒法測定的3份丹參種子的千粒重結果表明,3份種子2個重複之間的差數都<5%,表明測定結果有效。
用(yong)千(qian)粒(li)法(fa)和(he)百(bai)粒(li)法(fa)測(ce)定(ding)同(tong)一(yi)份(fen)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)樣(yang)本(ben)千(qian)粒(li)重(zhong)的(de)結(jie)果(guo)表(biao)明(ming),兩(liang)者(zhe)之(zhi)間(jian)沒(mei)有(you)顯(xian)著(zhu)性(xing)差(cha)異(yi),但(dan)與(yu)用(yong)千(qian)粒(li)法(fa)的(de)試(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)相(xiang)比(bi),用(yong)百(bai)粒(li)法(fa)測(ce)定(ding)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)的(de)千(qian)粒(li)重(zhong)過(guo)程(cheng)相(xiang)對(dui)簡(jian)單(dan),所(suo)以(yi)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)質(zhi)量(liang)的(de)測(ce)定(ding)宜(yi)采(cai)用(yong)百(bai)粒(li)法(fa)。
3.3 真實性鑒定
丹參種子外部形態特征:小堅果,三棱狀長卵形,長2.5~3.3 mm,寬1.3~2 mm,灰黑色或茶褐色,表麵為黃灰色糠秕狀蠟質層覆蓋,背麵稍平,腹麵隆起脊,圓鈍,近基部兩側收縮稍凹陷;果臍著生腹麵縱脊下方,近圓形,邊緣隆起,密布灰白色蠟質斑,中央有1條C形銀白色細線。
3.4 水分測定
用高恒溫烘幹法,丹參種子在最初的30 min內迅速失去水分,隨後失水緩慢;烘幹2.5,3,3.5 h時,測得種子的含水量值趨於穩定,故選擇適宜烘幹時間為3h。
3.5 生活力測定
用(yong)溴(xiu)麝(she)香(xiang)草(cao)酚(fen)藍(lan)法(fa)及(ji)紅(hong)墨(mo)水(shui)染(ran)色(se)法(fa)測(ce)定(ding)種(zhong)子(zi)生(sheng)活(huo)力(li),結(jie)果(guo)重(zhong)複(fu)性(xing)較(jiao)差(cha),不(bu)能(neng)反(fan)映(ying)種(zhong)子(zi)的(de)真(zhen)實(shi)生(sheng)活(huo)力(li)。紙(zhi)上(shang)熒(ying)光(guang)法(fa)測(ce)定(ding)種(zhong)子(zi)生(sheng)活(huo)力(li)時(shi),發(fa)芽(ya)法(fa)檢(jian)測(ce)出(chu)的(de)種(zhong)子(zi)平(ping)均(jun)發(fa)芽(ya)率(lv)為(wei)46%,而熒光法則為15%,誤差較大,故不能用於丹參種子的生活力測定。因此,采用四唑染色法測定丹參種子生活力。
3.5.1 預濕處理
丹參種子直接浸泡在水中吸水充分,不容易出現破裂和損傷。預濕2,4,6 h的種子還未充分吸脹,且種皮尚硬;預濕12h後,種子吸脹充分而不過度,切剖最容易。預濕18,24h的種子吸水有些過度,組織有些腐軟。故預濕方法選取為常溫下在蒸餾水中直接浸泡12h。
3.5.2 暴露種子組織的方法
完整剝去種皮的染色情況很好,顏色均勻,但是在觀察時還需再將種子剖開露出胚,操作上費工、費時,故不宜采用。沿腹縫線縱切與從子葉末端橫切去2/5的種子染色不太均勻,且不易觀察,也不宜采用。而沿垂直腹縫線縱切去2/5的種子染色情況很好,顏色均勻,也方便觀察,所以最終采用此法。
3.5.3 溶液的濃度和染色時間
在0.5%的四唑溶液染色,4h內完全染色的種子數隨著染色時間的增加而增加,此後染色的種子數目基本不變,且種子染色均勻、深淺適宜(表4)。用5%四唑溶液染色4 h已經充分,且4~6 h內顏色正常,7 h後顏色過深,不便觀察。故丹參種子生活力測定為0.5%四唑溶液染色4 h。

表4 不同染色時間下丹參種子染色結果
3.5.4 生活力鑒定標準
200粒丹參種子離體胚發芽試驗中,可以看到,完整的胚發芽,長成的幼苗也是完整的,有些完整胚即使是新鮮的,但也不能發芽;即使種子胚能生成完整的子葉,一旦根有缺損,也不能生長成正常幼苗;子葉破損麵積達1/2以上的胚不能發芽;生成的正常幼苗中,子葉若有破損,均是端處或側邊破損等於或小於子葉總麵積的1/3。
根據200粒丹參種子四唑染色數據,擬定出丹參種子生活力四唑染色的鑒定標準(表5)。有生活力種子類:胚全部染色;子葉遠胚根一端≤1/3不染色,其餘部分完全染色;子葉側邊總麵積≤1/3不染色,其餘部分完全染色;無生活力種子類:胚完全不染色;子葉近胚根處不染色;胚根不染色;子葉不染色總麵積>1/3;胚所染顏色異常,且組織軟腐。

表5 丹參種子離體胚發芽和四唑染色結果總計
4 討論
在種子檢驗中,種子質量一般可概括為兩個方麵,一是反應品種品質的純度和真實性;二是體現種子播種品質的淨度、千粒重、發芽率、生活力、活力、健康度和水分含量等。盡管衡量種子質量特性較多,最終目的是要測定種子的種用價值。我國從20世紀50年代至今,執行的農作物種子質量標準中,以純度、淨度、發芽率和水分4項指標對種子質量進行分級定級。但是隨著種子產業發展的需要,在發達國家種子質量評價不再局限於傳統的4項指標,對種子健康度、種子活力和品種純度檢驗的要求也日益增多。
丹參種子外表皮上有1層(ceng)果(guo)膠(jiao),遇(yu)水(shui)後(hou)迅(xun)速(su)吸(xi)漲(zhang),果(guo)膠(jiao)中(zhong)的(de)糖(tang)類(lei)等(deng)有(you)機(ji)物(wu)溶(rong)解(jie),在(zai)熒(ying)光(guang)下(xia)會(hui)出(chu)現(xian)光(guang)圈(quan),所(suo)以(yi),用(yong)熒(ying)光(guang)法(fa)測(ce)定(ding)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)生(sheng)活(huo)力(li)時(shi)不(bu)能(neng)夠(gou)準(zhun)確(que)地(di)分(fen)別(bie)出(chu)死(si)種(zhong)子(zi)與(yu)活(huo)種(zhong)子(zi)。
山(shan)東(dong)為(wei)我(wo)國(guo)丹(dan)參(can)的(de)主(zhu)產(chan)區(qu),主(zhu)要(yao)以(yi)種(zhong)子(zi)育(yu)苗(miao)移(yi)栽(zai)的(de)方(fang)式(shi)進(jin)行(xing)栽(zai)培(pei),且(qie)為(wei)我(wo)國(guo)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)的(de)主(zhu)要(yao)產(chan)地(di),近(jin)年(nian)來(lai),陝(shan)西(xi)商(shang)洛(luo)也(ye)采(cai)用(yong)育(yu)苗(miao)移(yi)栽(zai)的(de)方(fang)式(shi)進(jin)行(xing)栽(zai)培(pei),而(er)四(si)川(chuan)中(zhong)江(jiang)主(zhu)要(yao)采(cai)用(yong)分(fen)根(gen)栽(zai)培(pei)的(de)方(fang)式(shi),因(yin)此(ci),以(yi)山(shan)東(dong)產(chan)的(de)丹(dan)參(can)種(zhong)子(zi)為(wei)試(shi)驗(yan)材(cai)料(liao)具(ju)有(you)一(yi)定(ding)的(de)代(dai)表(biao)性(xing)。



